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ATCC菌種如何改良制備

更新時(shí)間:2016-07-20      點(diǎn)擊次數(shù):2306
    ATCC菌種是指食用菌、工業(yè)菌、農(nóng)用菌菌絲體及其生長基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種是從事微生物學(xué)及生命科學(xué)研究的基本材料,在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中,診斷制品的制備,菌苗的生產(chǎn)、微生物致病性研究,藥物的抑菌試驗(yàn)及藥品微生物檢驗(yàn)等都有一套完整的菌種菌種分為母種(一級種)、原種(二級種)和栽培種(三級種)三級。
   

ATCC菌種如何改良制備?

   

ATCC菌種的改良:

    即采用遺傳育種的方法,使野生型菌株(從自然界分離篩選而得的出發(fā)菌株)的遺傳因子 DNA發(fā)生突變、重組,從而從中選出產(chǎn)量高、成品質(zhì)量好或具有新的培養(yǎng)特性如耐產(chǎn)物抑制、能利用廉價(jià)原料以及具有生產(chǎn)新品種能力的優(yōu)良菌種。采用的方法有誘變育種、雜交育種、細(xì)胞融合技術(shù)和重組DNA技術(shù)。誘變育種是利用誘變因子如紫外線、鈷-60、乙烯亞胺類等物理或化學(xué)誘變劑處理生產(chǎn)菌株的單孢子懸浮液,以獲得誘發(fā)突變株。隨后進(jìn)行突變株的篩選,從中篩選高產(chǎn)菌株。由于隨機(jī)的突變?nèi)后w中,有益突變所占比例很低,要獲得高產(chǎn)突變株必須進(jìn)行大量篩選??筛鶕?jù)生物合成途徑中的反應(yīng)點(diǎn),并通過它們的改變以提高產(chǎn)率或其他特性,如選育抗產(chǎn)物反饋抑制的突變株、增加細(xì)胞透性的突變株及營養(yǎng)缺陷型的突變株等。這種"理性篩選法"廣泛應(yīng)用于氨基酸產(chǎn)生菌的選育。
   

ATCC菌種的制備:

    也稱種子制備,是指菌種在一定條件下,經(jīng)過擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。種子制備包括孢子制備和菌絲體制備,其中(1)~(4)為孢子制備過程。保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種,用無菌手續(xù)挑取少許,接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上,在25℃(或較高溫度)下培養(yǎng)5~7天(或較長時(shí)間)。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子,對于霉菌類孢子制備,多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基。將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液,接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上,于25~28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。放線菌孢子的培養(yǎng)基大多是采用麩皮或豌豆浸出液、牛肉膏及無機(jī)鹽與瓊脂制成的。將斜面孢子接入擴(kuò)大的扁瓶孢子培養(yǎng)基中,于28~37℃培養(yǎng)5~14天。所獲得的大量孢子可直接作為種子罐 (6)的種子。如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子,如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的,則可采用搖瓶(5)液體培養(yǎng)制得菌絲體,作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米漿等),及無機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐(7)的種子應(yīng)是生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯,無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%~20%。
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